Teeme ka PCR katseid, miks on tulemused alati nii palju halvemad kui teised?

Teeme ka PCR katseid, miks on tulemused alati nii palju halvemad kui teised?

Laboris vaadake teiste inimeste PCR-i, amplifikatsiooni efektiivsus on kõrge, elektroforeesi riba on täiuslik ja vaadake nende enda omadega, mida on pikka aega raske teha, et reaktsioon on väga hea, valepositiivse testi tulemus ... probleem?

Usun, et ka paljud meie partnerid on kokku puutunud erinevate probleemidega. Kui PCR-katsetes põrkame seina, analüüsime alateadlikult reaktsioonisüsteemi tegureid, kuid sageli ignoreerime katsetes tarbekaupade olulist mõju.

Teie PCR tulemus on vale, oluliseks põhjuseks võivad olla PCR kulumaterjalid. Ühest küljest põhjustab tarbekaupade mikroreostus või inhibiitorite kasutuselevõtt eksperimentaalset reostust; Teisest küljest paneb tarbekaupade vale valimine kannatama ka katsetulemused.

Probleem tuleb uuesti. PCR-i kulumaterjale on mitut tüüpi, siis kuidas valida õigeid, et katse sujuvam oleks? Millistele probleemidele tuleb tähelepanu pöörata? Ära muretse, tänaI koos paljude aastate kogemustega PCR kulumaterjalide valimisel levinud probleemide lahendamisel loodan teid aidata.

 

1. küsimus: miks on PCR-tarbekaubad tavaliselt valmistatud PP-materjalist?

Huida: Kuna PCR-varud on tavaliselt otseses kontaktis reagentide või proovidega, on polüpropüleen (PP) materjalid bioloogiliselt inertsed, ei kleepu biomolekulidele ning neil on hea keemiline ja temperatuuritaluvus (neid saab autoklaasida temperatuuril 121 ° C). ° C, talub ka temperatuuri muutusi termilise tsükli ajal).

 

2. küsimus: kuidas peaksin valima PCR torude / plaatide erineva suuruse vahel?

HUIDA: Valiku eesmärk: valige õiged tooted vastavalt konkreetsetele katsenõuetele. Suurem osa PCR-tuubi suurusest võib vastata PCR-reaktsiooni nõuetele. Selle põhjal on soovitatav kõigepealt valida väikese mahuga toru. Kuna väikese mahuga reaktsioonitorul / plaadil on väike õhuruum, paraneb soojusjuhtivus ja aurustumine väheneb. Samal ajal on vaja vältida liiga palju või liiga vähe proove. Liiga palju võib põhjustada vähenenud soojusjuhtivust, lekkimist ja ristsaastumist, liiga väike võib põhjustada proovi aurustumiskadu.

Tavaliste reaktsioonitorude spetsifikatsioonid ja mahud:

Üksik / kombineeritud toru: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,15 ml

96 süvendiga plaat: 0,2 ml, 0,15 ml

384-auguline plaat: 0,04 ml

 

3. küsimus: kui proovi kogus on väike, valin ühe toru või kombineeritud toru, kuid miks mõnel on lame kate ja mõnel on kumer kate?

Huida: Kui proovi kogus on väike, eelistatakse ühte või kombineeritud toru. Kui reaktsioonimaht on suur, on domineeriv üks tuub ja maht võib ulatuda 0,5 ml-ni. Nii tasasel kui ka kumeral kattel on eelis, konkreetne võib viidata järgmisele teabele.

Üks tuub: 0,2 ml ja 0,5 ml; Saab proovi kogust paindlikult valida.

Ühendustoru: 0,2 ml või 0,15 ml on valikuline; 8 või 12 toru on tavalised.

Lamekate: suudab qPCR-i jaoks täpse fluorestsentssignaali edastada; Lihtne märke kirjutada.

Kumer kate: kokkupuude PCR-seadme kuuma kattega, et vähendada reaktsioonitoru rõhust põhjustatud deformatsiooni; Kuid see mõjutab fluorestsentssignaali ülekannet ja seda ei saa rakendada qPCR eksperimendile.

 

4. küsimus: miks mõnel PCR-plaadil on seelikud ja mõnel mitte?

Huida: Tegelikult on PCR-plaadi seelik mõeldud selleks, et paremini kohaneda automatiseerimisrakendustega, pakkudes instrumendile stabiilset tuge ja mehaanilist vastupidavust, samuti suuremat stabiilsust pipeteerimise ajal.

PCR-plaadid jagunevad tavaliselt mitte-hemline, pool-hemline ja full-hemline.

Ilma Plaat: sobib enamiku PCR-masinate või qPCR-masinate jaoks, kuid mitte automatiseerimisrakendusteks. Pipeteerimise käigus ei ole stabiilsus kõrge, seetõttu tuleb seda kasutada plaaditoega.

Pool seeliku servaplaati: saab kohandada sildi või vöötkoodi rakendamiseks ja automaatseks pealekandmiseks ning sellel on hea pipeteerimise stabiilsus.

Täielik seeliku servaplaat: sobib väga hästi automatiseeritud eksperimentaalseks kasutamiseks, seda saab kohandada ka vöötkoodi etiketi ja rakenduse järgi. Sellel on hea mehaaniline tugevus, seda saab kasutada punnimooduli PCR-instrumendis ja sellel on kõrge stabiilsus pipeteerimise käigus.

 

Q5 :Miks pole PCR-plaatide puhul nurgad ja sildid päris ühesugused?

Huida: See sõltub nurga lõikamise ja märgistuse mõjust.

Nurgalõikamine: PCR-plaadi nurgalõikeasendi valik sõltub hõlpsaks positsioneerimiseks sobiva instrumendi nõuetest.

Identifitseerimine: tähtnumbrilised markerid PCR-plaatidel aitavad tuvastada üksikuid süvendeid ja proovide asukohti. Üldiselt reljeefse värvilise digitaalse logo või graveeritud logo jaoks. Mõne automatiseeritud rakenduse jaoks on trükitud ja märgistatud reaktsiooniplaadid paremini suletud.

 

6. küsimus: miks mõned PCR-plaadid on kumerad, teised on lamedad? Mis on parem?

Huida: Mis sobib, on parim. PCR-plaate on kahte tüüpi: lameda poorimarginaaliga ja kõrge poorimarginaaliga.

Lameda auguga servareaktsiooniplaat, sobib enamiku PCR-aparaatide jaoks.

Reaktsiooniplaadid, mille avauseservad tõusevad, hõlbustavad membraani tihendamist ja vähendavad proovide vahelise ristsaastumise ohtu.

 

Huidal on paljude aastate kogemus PCR-toodete tootmisel ja töötlemisel ning tööstuse kõrged standardid. Tootesari on rikas ja suudab rahuldada valdavat enamust PCR-i eksperimentaalsetest rakendustest. Tule ja vali oma eksperimentaalsete rakenduste jaoks sobivad tooted.

谷歌推广疫情产品PCR


Postituse aeg: juuni-03-2021