Teeme ka PCR katseid, miks on tulemused alati nii palju kehvemad kui teistel?

Teeme ka PCR katseid, miks on tulemused alati nii palju kehvemad kui teistel?

Laboris vaadake teiste inimeste PCR-i, amplifikatsiooniefektiivsus on kõrge, elektroforeesriba täiuslik ja vaadake oma, pikka aega raske teha, tunnetage, et reaktsioon on väga hea, valepositiivse testi tulemus…… probleem?

Usun, et ka mitmed meie partnerid on kokku puutunud erinevate probleemidega.Kui me PCR-katsetes vastu seina jookseme, analüüsime alateadlikult reaktsioonisüsteemi tegureid, kuid sageli ignoreerime kulumaterjalide olulist mõju katsetes.

Teie PCR-tulemus on vale, põhjuseks võivad olla PCR-i kulumaterjalid.Ühest küljest põhjustab tarbekaupade mikrosaastumine või inhibiitorite kasutuselevõtt eksperimentaalset reostust;Teisest küljest kahjustab tarbekaupade ebaõige valik ka katsetulemusi.

Probleem tuleb uuesti.PCR-i kulumaterjale on mitut tüüpi, kuidas siis valida õigeid, et katse oleks sujuvam?Millistele probleemidele tuleb tähelepanu pöörata?Ära muretse, tänaI Loodan teid aidata koos paljude aastatepikkuse kogemusega PCR-i kulumaterjalide valimise levinumate probleemide lahendamisega.

 

K1: Miks on PCR-i tarbekaubad tavaliselt valmistatud PP-materjalist?

Huida: kuna PCR-i tarvikud on tavaliselt otseses kontaktis reagentide või proovidega, on polüpropüleenist (PP) materjalid bioloogiliselt inertsed, ei kleepu biomolekulidele ning neil on hea keemiline ja temperatuuritaluvus (saab autoklappida 121 kraadi juures° C, talub ka temperatuurimuutusi termilise tsükli jooksul).

 

Q2: Kuidas valida erineva suurusega PCR-tuubide/plaatide vahel?

HUIDA: valiku eesmärk: valige õiged tooted vastavalt konkreetsetele katsenõuetele.Suurem osa PCR-tuubi suurusest vastab PCR-reaktsiooni nõuetele.Sellest lähtuvalt on soovitatav kõigepealt valida väikese mahuga toru.Kuna väikese mahuga reaktsioonitorul/plaadil on väike õhuruum, paraneb soojusjuhtivus ja väheneb aurustumine.Samas tuleb vältida liiga palju või liiga vähe proovide lisamist.Liiga palju võib põhjustada soojusjuhtivuse vähenemist, lekkimist ja ristsaastumist, samas kui liiga vähe võib põhjustada proovi aurustumiskadu.

Tavaliste reaktsioonitorude tehnilised andmed ja mahud:

Üksik/kombineeritud tuub: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,15 ml

96 süvendiga plaat: 0,2 ml, 0,15 ml

384 süvendiga plaat: 0,04 ml

 

Q3: kui proovi kogus on väike, valin ühe toru või kombineeritud toru, kuid miks mõnel on lame kate ja mõnel kumer kate?

Huida: kui proovi kogus on väike, eelistatakse üksikut või kombineeritud katsutit.Kuid kui reaktsiooni maht on suur, domineerib üks toru ja maht võib ulatuda 0,5 ml-ni.Ja lame kate ja kumer kate on mõlemal eelis, konkreetne võib viidata järgmisele teabele.

Üks tuub: 0,2 ml ja 0,5 ml;Saab valida proovikoguse paindlikult.

Ühendustoru: 0,2 ml või 0,15 ml on valikuline;Tavalised on 8 või 12 toru.

Lame kate: võib pakkuda qPCR-i jaoks täpset fluorestsentssignaali edastamist;Lihtne kirjutada märke.

Kumer kate: kontakt PCR-instrumendi kuuma kattega, et vähendada reaktsioonitoru rõhust tingitud deformatsiooni;Kuid see mõjutab fluorestsentssignaali edastamist ja seda ei saa qPCR-katses rakendada.

 

4. küsimus: miks mõnel PCR-plaadil on seelikud ja mõnel mitte?

Huida: Tegelikult on PCR-plaadi ääris loodud paremini kohanema automatiseerimisrakendustega, pakkudes instrumendile stabiilset tuge ja mehaanilist vastupidavust, samuti suuremat stabiilsust pipeteerimisprotsessi ajal.

PCR-plaadid jagunevad üldiselt mitte-hemline-, pool-hemline- ja full-hemline-teks.

IlmaPlaat: sobib enamikule PCR-masinatele või qPCR-masinatele, kuid mitte automatiseerimisrakendustele.Pipeteerimisel ei ole stabiilsus kõrge, seetõttu tuleb seda kasutada koos plaaditoega.

Poolseeliku servaplaat: saab kohandada sildi või vöötkoodi pealekandmiseks ja automaatseks pealekandmiseks ning sellel on hea pipeteerimise stabiilsus.

Täieliku seeliku servaplaat: sobib väga hästi automatiseeritud eksperimentaalseteks rakendusteks, saab kohandada ka märgistuse ja vöötkoodi rakendamisega.Sellel on hea mehaaniline tugevus, seda saab kasutada kühmumooduli PCR-instrumendis ja sellel on pipeteerimisprotsessis kõrge stabiilsus.

 

Q5 :Miks ei ole PCR-plaatide nurgad ja sildid päris samad?

Huida: See sõltub nurgalõikuse ja märgistuse mõjust.

Nurga lõikamine: PCR-plaadi nurga lõikeasendi valik sõltub sobiva instrumendi nõuetest lihtsaks positsioneerimiseks.

Identifitseerimine: PCR-plaatidel olevad tähtnumbrilised markerid aitavad tuvastada üksikuid süvendeid ja proovide asukohti.Tavaliselt reljeefse värvilise digitaalse logo või graveeritud logo jaoks.Mõnede automatiseeritud rakenduste puhul on prinditud ja märgistatud reaktsiooniplaadid paremini suletud.

 

K6: Miks on mõned PCR-plaadid kumerad, teised aga tasased?Mis on parem?

Huida: Mis sobib, on parim.Tavalisi PCR-plaate on kahte tüüpi: tasane pooripiir ja kõrge poorivaru.

Lameda auguga veerise reaktsiooniplaat, sobib enamiku PCR-seadmete jaoks.

Tõusvate ava servadega reaktsiooniplaadid hõlbustavad membraani tihendamist ja vähendavad proovidevahelise ristsaastumise ohtu.

 

Huidal on aastatepikkune kogemus PCR-toodete tootmisel ja töötlemisel ning tööstuse kõrged standardid.Tootesari on rikkalik ja sobib enamikule PCR eksperimentaalsetest rakendustest.Tulge ja valige oma eksperimentaalsete rakenduste jaoks sobivad tooted.

谷歌推广疫情产品PCR


Postitusaeg: juuni-03-2021

Saada meile oma sõnum:

Kirjutage oma sõnum siia ja saatke see meile